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低温生物***的保存方法

低温保存法

①简单保存法，将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4℃冰箱保存,保存时间不超过1～2个月，若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡,以隔绝外界空气和水汽,保持时间可达3～4个月；

②液氮超低温保存法，将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中，密封于安瓿管内，然后控制冷却速度，使安瓿管温度逐步下降至 -35℃时，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种***、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物，都可用此法长期保存。

低温生物***——保存方法介紹

脱水存法

①沙土保存法，能产孢子的***及霉菌可采用此法保存,即将沙和土以3:2比例混合，经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm;灭菌2～3次，烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子，用无菌蒸馏水2～2.5ml制成孢子悬液，吸取少许加入沙土管中，经真空抽干，外观呈松散状态,于4℃冰箱保存，保存期可达5～7年。

② 冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂（一般用脱脂牛奶）相混合，放在安瓿管内于-20～-30℃的乙醇浴中速冻。然后，在低温下用真空泵抽干，并用氧化磷或干冰使水汽结冻，熔封安瓿管，于低温下保存。保存期可达5～10年之久。

③ 石蜡油封存法，在斜面***培养物上,倒上灭菌后的石蜡油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低温干燥处保存，此法不适用于能利用石蜡油作碳源的微生物，保存期为一年以上。

低温生物知多少？

实验室的传代保藏过程

1. 按说明书要求复溶菌粉，转种于适当的增菌培养基内（G1），复壮后转接至平板上，并于适当温度下培养适当时间，分离出单个纯种菌落，此为第2代（G2）。

2. 鉴定完成后，挑取纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管，同时挑取纯菌落转接斜面作为工作用。此时，保藏为第2代，但工作用则为第三代。

3. 将第2代管冷冻保存，将工作用于适当温度下培养适当时间后可用于试验。

4. 取一支冷冻保存的G2代转种于平板和斜面培养基上，平板上的制成冷冻保藏管第三代（G3），斜面培养基经适当温度下培养适当时间后用作工作用（W3）。

5. 将第三代（G3）冷冻或低温保存，将生长、转种后的G2经灭菌处理后丢弃。

6. 当工作用代数小于5时，可直接用上一代工作用转接下一代工作用，如W3可直接转接为W4。

7. 按上述程序操作，直至G4转为W5为止，需重新开启安瓿，再重复上述操作程序、保藏和使用。

以上方法中，被分为两类。传代用和工作用，传代用用于甘油冷冻管法保藏，工作用用斜面低温保藏法保藏。

实验证明，甘油冷冻管的有效期至少为2年，但其主要适用于***（需氧）、酵母菌的传代、保藏、***和芽孢类***则需应用其它方法。

生物发酵成有机肥如何操作的？

生物有机肥能够调理土壤、土壤中微生物活跃率、克服土壤板结、增加土壤空气通透性。提高土壤肥力，使粮食作物、经济作物、蔬菜类、瓜果类大幅度增产。

生物有机肥的制作方法

可根据当地的原料进行制作，如城市生活垃圾和各种农作物秸秆，剩饭菜、人动物粪便等废弃物。

发酵肥料操作过程：

1、一般用量为0.2%--0.5%。

2、原辅料及要求：

辅料：各种农作物秸秆、树叶杂草、谷壳粉、统糠等干燥、粉碎、高碳即可。

3、原辅料配比：主料∶辅料=5:1-3:1。

4、水分控制在60-65%，手抓物料成团刚好出水。

5、按要求将、主料和辅料全部混合均匀。

6、环境温度15℃以上，一次堆料不少于4方，堆成宽1.5～2米、高0.6米左右、长度不限的堆，并用棍在堆内打通气孔。

7、堆温升至50℃时开始翻倒，每天一次，如堆温超过65℃，再加次翻倒。温度控制在70℃以下，温度太高对养分有影响。

8、腐熟标志：堆温降低，物料疏松，无物料原臭味，稍有氨味，堆内产生白色菌丝。

9、腐熟的原肥：直接使用，生产商品有机肥、生物有机肥、有机无机复混肥、生物有机无机复混肥等。