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低温生物***——***分离方法介绍

孢子分离又可分为以下几种方法：

( 1 ）褶上涂抹法：选取新鲜、健壮、未开伞、未裂破的子实体，洗净后用75 %酒精表面灭菌2 分钟，然后连同培养基一起放入接种箱内，经熏蒸消毒12 ～ 24 小时，再按无菌操作技术将接种环在子实体菌褶上涂抹，把涂抹后带孢子的接种环在培养基上划线接种，，后置于25 ～ 28 ℃恒温箱内培养，可得纯***。

( 2 ）孢子印采集法：取灭过菌的载玻片、试纸或黑布，置于新鲜、未开伞或未开裂的子体菌褶的下方。经24 小时后，便落下孢子，形成印痕（即孢子印）。然后，用接种环或玻璃棒蘸取孢子，接种在平面或斜面培养基上，进行恒温培养，可得纯***。

( 3 ）孢子收集器采集法：孢子收集器由玻璃钟罩、培养皿、三角架、搪瓷盘等组成。钟罩下为一搪瓷盘，直径25 厘米左右，盘内先垫衬4～6 层纱布，***放1 副9 厘米直径的培养皿，大盖口朝下，上放小的，口向上。然后，在上面小的培养皿上放1 只铅丝绕成的三角架，再将带孔的玻璃钟罩盖上，顶上罩孔用棉塞塞好，用纱布包好整个孢子收集器，置于高压灭菌锅或蒸笼内灭菌2小时。

孢子收集器灭菌消毒后，放入无菌室或无菌箱内。然后，用小刀割取1 块4～5 厘米大小的子实体，插在收集器内的三角架顶上（若无孢子收集器，也可用培养皿代替）。再置于温度24 ～26 ℃下培养24 小时，培养皿中便可见到白色粉状物，此即为孢子。此时，可将孢子收集器再移至接种箱内，取出培养皿，盖好，并在培养皿内加入10 ～ 20 毫升的无菌水，使孢子散于本中，成为孢子悬浮液。然后，再用无菌打针筒或吸管吸取孢子悬浮液，接种于试管斜面培养基上，每管注2 ～ 3 滴。置于24 ～ 26 ℃温度下培养5 ～ 7 天，培养基上便可长出白色菌落。待菌落直径有0 . 5 厘米时，选健壮的菌落，再移接于另一试管的斜面培养基上培养。当白色菌丝长满试管时，便得纯***。

生物有机肥产品生产使用现状

***类生产用除常见的芽孢外， 还出现了高地芽孢菌、 类干酪乳菌、 屎肠球菌、 盐居固氮菌等新， 其中， 高地芽孢菌和盐居固氮菌普遍存在于土壤环境中， 未见致病性报道， 属风险一级； 类干酪乳菌又名为副干酪乳菌， 虽为风险一级 ， 但有从动物受伤部位分离到该菌的报道；屎肠球菌属于乳酸菌类，属风险二级， 建议谨慎使用。伯克霍尔德氏菌是一些具有生物防治、 促进植物生长和生物修复等功能的***， 但同时也是可以引起鼻疽、 类鼻疽病的致病菌， 因此***伯克霍尔德氏菌属于风险三级， 需做致病性试验， 建议慎用或不用。***类生产用菌株主要为丝状***和酵母菌。哈茨木霉、 米曲霉、 淡紫紫孢菌、 长枝木霉、 绿色木霉、 棘孢木霉、 黑曲霉、 粉红螺旋聚孢霉、 金龟子绿僵菌等属于生物安全风险等级二级， 需按照NY/T 1109－2017 《微生物肥料生物安全通用技术准则》 进行毒理学测试。酵母菌主要以酿酒酵母为主， 还有少量东方伊萨酵母、杰丁塞伯林德纳氏酵母 （原产朊假丝酵母、 杰丁毕赤酵母）、 膜醭毕赤酵母、 解脂耶罗威亚酵母等， 属于生物安全风险等级一级， 可免做毒理学试验。

耐低温生物-选择开碧源

水医生--开碧源从17年开始就和清华大学及北京云阳张环保设备厂联合将耐低温从实验室的小试走向规模化的中试，在北京顺义马坡工业区污水厂进行耐低温的耐低温中试验证，俩套一模一样AO氧化接触工艺的日处理10吨的污水中试设备，从5月份开始同时培养微生物，一套投加耐低温生物，一套没有投加耐低温，驯化培养运行30天后，开始定期取样检测，经对比验证，添加耐低温的中试设备，从挂膜速度及COD氨氮磷及总氮的去除率，都比没有添加耐低温的中试设备高10--30%，中试一直连续运行到冬天，没有添加耐低温的中试设备做保温和加盖处理，添加耐低温的中试设备没有做保温和加盖处理。，没有做保温的中试设备，水温达到3.5度（保持在5度左右），水面已经结冰，做保温加盖的中试设备，水面没有结冰，水温保持在10度左右，进水量和进水水质指标都一样，持续低温运行，并连续取样化验，做保温的中试设备，进水和出水几乎一致，证明：普通在水温10度的时候，已经停止工作，几乎没有任何降解能力。