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低温生物***——保存方法介紹

脱水存法

①沙土保存法，能产孢子的***及霉菌可采用此法保存,即将沙和土以3:2比例混合，经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm;灭菌2～3次，烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子，用无菌蒸馏水2～2.5ml制成孢子悬液，吸取少许加入沙土管中，经真空抽干，外观呈松散状态,于4℃冰箱保存，保存期可达5～7年。

② 冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂（一般用脱脂牛奶）相混合，放在安瓿管内于-20～-30℃的乙醇浴中速冻。然后，在低温下用真空泵抽干，并用氧化磷或干冰使水汽结冻，熔封安瓿管，于低温下保存。保存期可达5～10年之久。

③ 石蜡油封存法，在斜面***培养物上,倒上灭菌后的石蜡油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低温干燥处保存，此法不适用于能利用石蜡油作碳源的微生物，保存期为一年以上。

低温生物***——***分离方法

寄主分离法即从生长有某种***的寄主体上（如茯苓、木耳木段）取下木片，进行分离的方法。如木耳制种时，可选朵大、出耳多、质厚的耳棒（即长有木耳的木段）。采集后，削去耳根下的树皮，将其横断面锯成1 厘米厚的木片，在无菌条件下，切去无耳菌丝部分，留下有耳菌丝部分，浸入水中1 分钟，取出再用无菌水冲去木片上的液体。然后，用解剖刀将木片切成0 . 5 厘米的小块，放入斜面培养基内，置24 ～26 ℃下培养，及时淘汰杂菌，选取纯菌丝进行移植培养，即得***。

低温生物***——常用***介绍

球形芽孢菌

球形芽孢菌是一种在自然界中广泛分布、形成亚末端膨大孢子囊和球形芽孢的好气芽孢菌。在已发现的49个鞭毛型中有9个(H1、H2、H3、H5、H6、H9、H25、H26和H48)的菌株对蚊幼虫有一定的杀毒作用。其中大部分高毒力菌株属型H5、H6和H25，如2362、1593、2297、Ts-1和C3-41等[6～11]。根据其杀蚊活性，这些菌株分为高毒力菌株和低毒力菌株，所有***菌株都具有较高的DNA同源性（>79%），属DNA同源型IIA型。

球形芽孢菌对不同蚊幼虫的杀毒作用主要是由其产生的毒蛋白实现的。现已证明在其生长发育过程中能产生两类不同毒蛋白，一类是存在于所有高毒力菌株中的晶体毒蛋白；另一类是存在于低毒力菌株中部分高毒力菌株中的Mtx素蛋白。

低温生物***——常用***介绍

固氮菌

固氮菌属于***的一科。菌体杆状、卵圆形或球形，无内生芽孢，革兰氏染色阴性。好氧，厌氧，兼性厌氧均有，有机营养型，能固定空气中的氮素。包括固氮菌属、氮单孢菌属、拜耶林克氏菌属和德克斯氏菌属。固氮菌肥料多由固氮菌属的成员制成。氮是植物生长不可缺少的物质，是合成蛋白质的主要来源，固氮菌擅长从空中取氮，它们能把空气中植物无法吸收的氮气转化成氮肥，源源不断地供植物享用。自生固氮微生物是指在土壤中能够利用的是土壤中的腐殖质***进行固氮的微生物，其中，多数是一类叫做自生固氮菌的***。经过两三天的培养，成对的菌体呈“8”字形排列，并且外面有一层厚厚的荚膜。自生固氮菌中，人们应用得较多的是圆褐固氮菌(Azotobocter chroococcum）。圆褐固氮菌具有较强的固氮能力，并且能够分泌生长素，促进植株的生长和果实的发育，因此，将圆褐固氮菌制成菌剂，施用到土壤中，可以提高农作物的产量。

地衣芽孢菌

提高作物抗病、抗寒、抗旱能力；增加土壤养分、改良土壤结构、提高化肥利用率；促使土壤中的有机质分解成腐殖质，刺激作物生长。促进作物生长、成熟、降低成本、增加产量、提高收入；有一定的固氮、解磷、解钾作用。