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低温生物***的筛选分离

筛选

工业发酵的有用***，其筛选步骤包括***分离、初筛和复筛，挑选具有某种能力的有用***。

分离

首先是从土壤或腐生植物中收集含菌样品，用无菌水稀释后，涂布于置有适宜***或霉菌生长的琼脂培养基平皿上，并将其倒置于恒温箱中，培养一定时间，平皿上长出的许多单个菌落（单一微生物的集落）经分别分离后即为各种纯种菌株，简称纯种，移种至试管斜面培养基上，置4℃冰箱备用。

低温生物***的保存方法

低温保存法

①简单保存法，将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4℃冰箱保存,保存时间不超过1～2个月，若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡,以隔绝外界空气和水汽,保持时间可达3～4个月；

②液氮超低温保存法，将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中，密封于安瓿管内，然后控制冷却速度，使安瓿管温度逐步下降至 -35℃时，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种***、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物，都可用此法长期保存。

低温生物***——常用***介绍

胶质芽孢菌

胶质芽孢菌又称硅酸盐***，其重要特性是能够分解出长石、云母等矿物中的钾、硅，也能分解出磷灰石中的磷，以及分泌植物多种酶，以增强作物对一些病害的抵抗力。这类***是用作生物肥料的好***，以促进土壤无效磷钾的转化，增加土壤磷钾的供给，提高作物产量，其胶质芽孢菌解磷、解钾、解硅的强度强。胶质芽孢菌能够产生碳酸酐酶，对二氧化碳的固定具有一定的作用。

a、分解出长石、云母等矿物中的钾、硅，也能分解出磷灰石中的磷，，具有溶磷、释钾和固氮功能，同时能在生长繁殖过程中产生有机酸、氨基酸、多糖等有利于植物吸收和利用的物质。

b、本品在土壤中繁殖后，分泌植物多种酶，以增强作物对一些病害的抵抗力；也***其他病原菌的生长。

c、菌体内的钾在菌体死后，游离出来，又可被植物吸收利用。作为微生物肥料中的一种重要功能菌，可提高土壤钾、磷含量，提高作物产量和品质等多种效。

巨大芽孢菌

巨大芽孢菌(Bacillus megaterium de Bary，1884)：杆状，末端圆，单个或呈短链排列。1.2-1.5×2.0-4.0微米，严格好氧，能运动，革兰氏阳性，芽孢1.0-1.2×1.5-2.0微米，椭圆形，中生或次端生 。芽孢从椭圆形到长形不等；不能生成乙酰；菌株能运动，但运动缓慢，需要游离氧；发酵葡萄糖产酸；DNA的G+C含量为36%-38%。 

接触酶阳性；水解淀粉和酪素；V-P反应和卵黄反应阴性。琼脂平板微波状，平隆，浅黄白色转浅灰白色至浅灰褐色，表面略有光泽，在马铃薯块上生长，由浅黄***变为***。液化明胶慢、胨化牛奶、水解淀粉。 

工业上用于生产葡萄糖异构酶，巨大芽孢菌在回收***方面有着重要作用，还能降解土壤中难溶的含磷化合物，使之成为作物能吸收的可溶物巨大芽孢菌与球形芽孢菌混合培养时具有固氮增效作用，非常适合制成微生物肥料。 

巨大芽孢菌作为一种重要解磷***被广泛应用于农业生产中，将其优化培养制成菌剂肥料使用，可以提高土壤肥质，增产增收。近年来，随着微生物肥料在农业上的广泛应用，巨大芽孢菌以其在土壤中的解磷作用而被深入研究，是工业上生产解磷固钾肥的常用***，同时在水体处理和提高***发酵增香效果上有特别的作用。 

巨大芽孢菌能降解有机磷药和曲霉。张广志等人从长期受有机磷药污染的土壤中分离出3株能降解胺磷和芽孢菌，其中2株为巨大芽孢菌。孙丰芹发现巨大芽孢菌TRS-3对曲霉AFB1有去除作用，其发酵上清液降解AFB1的能力达到78.55%。